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綿羊促卵泡生成激素(FSH)檢測試劑盒
點擊次數(shù):1259 更新時間:2016-12-15

綿羊促卵泡生成激素(FSH)酶聯(lián)免疫分析

 

 

ELISA試劑盒使用說明書

 

 

本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定綿羊血清,血漿及相關(guān)液體樣本中促卵泡生成激素(FSH)的含量。

 

實驗原理:

 

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中綿羊促卵泡生成激素(FSH)水平。用純化的綿羊促卵泡生成激素(FSH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促卵泡生成激素(FSH),再與 HRP 標(biāo)記的促卵泡生成激素(FSH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促卵泡生成激素(FSH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中綿羊促卵泡生成激素(FSH)濃度。

 

試劑盒組成

 

試劑盒組成

48 孔配置

96 孔配置

保存

 

 

 

 

說明書

1

1

 

 

 

 

 

封板膜

2 片(48

2 片(96

 

 

 

 

 

密封袋

1

1

 

 

 

 

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

 

 

 

 

標(biāo)準(zhǔn)品:3600ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

 

 

 

 

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

 

 

 

 

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

 

 

 

 

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

 

 

 

 

顯色劑 A 液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

 

 

 

 

顯色劑 B 液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

 

 

 

 

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

 

 

 

 

濃縮洗滌液

20ml×20 倍)×1 瓶

20ml×30 倍)×1 瓶

2-8℃保存

 

 

 

 

 

樣本處理及要求

 

  • 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

 

  • 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

 

  • 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

 

  • 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞

1濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

 

  • 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

 

  • 標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

 

  • 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟:

 

  • 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,

濃度分別為 2400ng/L1600ng/L ,800ng/L400ng/L, 200ng/L)。

 

  • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

 

  • 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

 

  • 配液:將 3048T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 3048T 的 20 倍)倍稀釋后備用。

 

  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。

 

  • 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

 

  • 溫育:操作同 3

 

  • 洗滌:操作同 5。

 

  • 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

 

15 分鐘.

 

  • 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

 

  • 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

 

注意事項:

 

1 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

 

用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

 

2 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

 

3 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

 

控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

 

4 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD

 

2大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

 

5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

 

6 底物請避光保存。

 

7 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

 

8 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

 

9 本試劑不同批號組分不得混用。

 

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

 

計算:

 

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

(此圖僅供參考)

試劑盒性能:

 

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.95 以上。

 

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9% 11%

檢測范圍:

100ng/L -3000ng/L

保存條件及有效期:

 

1.試劑盒保存:;2-8℃。

 

2.有效期:6 個月

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號

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