EF03B-J2b 2016-01版
喹諾酮類(lèi)
快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
一、原理
試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物喹諾酮類(lèi)藥物和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗喹諾酮類(lèi)藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留喹諾酮類(lèi)藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出相應(yīng)殘留物喹諾酮類(lèi)藥物的含量。
二、試劑盒特性
組織 、血清 ········································ 1ppb
恩諾沙星(ENR) ·························· 100%
環(huán)丙沙星(CIF) ···························· 100%
氧氟沙星(OFL) ·························· 60%
奧索利酸(OXO) ··························· 116.86%
達(dá)氟沙星(DAN) ··························· 102.63%
諾氟沙星(NOR) ··························· 148.65%
洛美沙星(LOM) ·························· 86.24%
培氟沙星(PEF) ·························· 156.60%
依諾沙星(ENO) ··························· 98.97%
氟喹酸(FLU) ··························· 96.73%
麻保沙星(MAR) ·························· 110.63%
氨氟沙星(AMI) ··························· 98.86%
那氟沙星(NAD) ··························· 56.81%
組織、血清 ································· 85±20%
三、試劑盒組成
1 | 微量測(cè)試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍(lán)色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 20X濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:?jiǎn)蔚?20~200ul、單道100~1000ul、多道 250 ul
五、樣本前處理步驟
處理任何樣本時(shí),都必須注意:
(a) 實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
(b) 實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
配液1 樣本復(fù)溶液
將20X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:19(1份濃縮復(fù)溶液+19份去離子水)進(jìn)行稀釋。
a)組織樣本處理方法
1、稱(chēng)1.0±0.05g 均質(zhì)過(guò)的組織樣本于50ml離心管中;
2、加入10ml樣本復(fù)溶液,振蕩3min,4000r/min以上,15℃離心10min;
3、取上清50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):10
b)血清樣本處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 10倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含喹諾酮類(lèi)藥物量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.238, 樣本2的吸光度值為0.946,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為1.845; 0.1ppb為1.542;0.3ppb為1.130; 0.9ppb為0.635;2.7ppb為0.326; 8.1ppb為0.156。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物的實(shí)際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以喹諾酮類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮類(lèi)藥物實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
八、 注意事項(xiàng)
九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。