全血/組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑盒

Rapid Genomic DNA Kit

產(chǎn)品信息：

保存條件：本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。RnaseA、蛋白酶 K

可室溫運(yùn)輸，建議-20℃長期保存。

 產(chǎn)品介紹：

*的結(jié)合液/蛋白酶 K 迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除， 后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.重復(fù)性好:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2 提取純度高，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值達(dá) 1.7～1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

3. 簡單快速，一小時(shí)內(nèi)即可獲得超純的基因組 DNA

4. 廣 泛：適用于血液、多種動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織等。

 注意事項(xiàng)：

1. 結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。

3. 結(jié)合液 CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4. 洗脫液 EB 不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保批pH 大于7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應(yīng)該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：第-次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指#*定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 處理材料

a. 血液

如提取材料為血液，可直接使用220μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足

220µl用緩沖液BB補(bǔ)足220µl，振蕩混勻。

注意：如需處理更大體積血液，如300μl-1ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細(xì)胞裂解液 （例如，300μl血液加入900μl紅細(xì)胞裂解液），顛倒混勻， 室溫放置5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000rpm離心1 min（若離心 機(jī)*#高轉(zhuǎn)速不允許，也可3000rpm離心5 min，吸去上清，留下白細(xì)胞沉 淀，加220μl緩沖液BB， 振蕩至*混勻。 紅細(xì)胞裂解液本公司另外有售，可根據(jù)需要來決定購買。

b.  如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量 5-20μl，可加緩沖液 BB 補(bǔ)足 220μl 后進(jìn)行下面的裂解步驟。

c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000rpm 離心 1 min，棄上清，加 220μl

緩沖液BB，振蕩至*懸?。?/font>

d. 動(dòng)物組織（脾組織用量應(yīng)少 10mg）應(yīng)先打碎處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000rpm

離心 1 min，倒盡上清，加 220μl 緩沖液 BB，振蕩至*懸浮。

2. 提取組織培養(yǎng)細(xì)胞和動(dòng)物組織DNA時(shí)為清除RNA，加入5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻，室溫放置5 min。

3. 加入20µl蛋白酶K，振蕩混勻，置于55℃水浴中消化處理。

a. 提取血液基因組時(shí)，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。

b. 提取細(xì)胞基因組時(shí)，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。

c. 提取組織基因組時(shí)，加入Proteinase K混勻后，在56℃放置，直至組織溶解，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進(jìn)行下一步驟。

注意：不同組織裂解時(shí)間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過夜）。不會(huì)影響 后續(xù)操作。每小時(shí)顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可

• 加入結(jié)合液CB并充分混勻后，置于70℃水浴10 min，等溶液變清亮，12,000rpm短離心以去 除管蓋內(nèi)壁的水珠。

注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不*，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。當(dāng)血液體積≤200μl且沒有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲(chǔ)存條件不佳，水浴后顏 色可能為深褐色，注意溶液中沒有團(tuán)塊等沉淀

• 加入220µl的無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去 除管蓋內(nèi)壁的水珠。
• 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），

12,000rpm 離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱AC放回收集管中。

• 加入500µl抑制物去除劑IR，12,000rpm離心1 min。倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
• 加入500µl 漂洗液WB，12,000rpm離心30 sec。（使用前請檢查是否已經(jīng)加入無水乙醇）倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回

收集管中。

10. 重復(fù)步驟9的操作。

11. 將吸附柱AC柱放回收集管中，12,000rpm離心2 min，倒掉廢液。將AC吸附置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘

余的漂洗液。